《表4 不同检测方法对甘薯茎腐病疑似样本检测结果》

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《甘薯茎腐病菌Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用》

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Taq Man q RT-PCR检测中，Ct值<35，结果为阳性；Ct35或无Ct值，结果为阴性In TaqMan qRT-PCR assay，the Ct value<35，the result was positive；the Ct value≥35 or no Ct value，the result was negative

本研究选用来自浙江临安、金华、桐庐和温州等地的样本共70份（表4），样本有发黑坏死或水渍状病变的茎、叶柄组织，有叶脉及其周围发黑的叶片组织，有表皮发黑横切面可见黑褐色病斑的薯块和发病植株的根围土。采用分离培养法、常规PCR法和基于TaqMan探针的荧光定量PCR方法对这70份样品进行分析诊断。对发病的茎、叶柄组织及薯块，取病健交界处捣碎，浸出液划线培养；对于土壤样本，混匀过筛后随机称取10 g放入灭菌锥形瓶中，然后加入100 mL无菌水，置于25℃，200 r/min摇床上摇30 min，后三层滤纸过滤，吸取100μL滤液进行涂板。所有浸出液或滤液都在NGM培养基上涂板（Lee，Yu，2006），28℃培养48 h后挑选产生靛蓝的单菌落进行纯化培养，同时挑取单菌落制备成菌悬液，利用引物fliC-1/fliC-2对菌悬液看家基因fliC进行PCR扩增（Johan et al.，2012），扩增产物由杭州擎科梓熙生物技术有限公司进行测序，运用Blast对序列进行比对。将上述浸出液和菌悬液进行普通PCR和TaqMan qRT-PCR扩增，普通PCR扩增使用引物Ddad5/Ddad9，反应体系与方法如1.2.6所述；TaqMan qRT-PCR使用引物Ddad3/Ddad4，探针为ADdad2，反应体系与方法如1.2.5所述。