《表3 不同检测方法对甘薯茎腐病疑似样本检测耗时与检出阳性率的比较》

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《甘薯茎腐病菌Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用》

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对田间采集的70份样本分别利用NGM分离培养法、常规PCR法和TaqMan qRT-PCR法进行检测。结果显示，用所建立的TaqMan qRT-PCR方法进行扩增，有64份样本呈现明显扩增曲线（图8），Ct值介于15.77至32之间（表4），表明这64份样本中有D.dadantii，检出率达91.4%；利用普通PCR进行检测，检出54份阳性，检出率77.1%（表3）；而用培养基NGM进行分离，有50份样本浸出液在NGM培养基上划线培养肉眼可见产生靛蓝的菌落（图9），挑取单菌落纯化培养，用引物fliC-1/fliC-2对菌落进行PCR扩增测序，经序列分析证实是D.dadantii，表明用培养基NGM分离检出率为71.4%（表3），与TaqMan qRT-PCR和常规PCR相比，分离培养法耗时费力，需要96 h，且工作量大，容易受其他菌的干扰，不适用于样品的快速检测；常规PCR和分离培养法相比，灵敏度和特异性有了大幅提升，但检测效率还是低于TaqMan qRT-PCR。综上所述，TaqMan qRT-PCR法特异性强、灵敏度高，检测省时省力，适合实际样品的快速检测。