《表3 引物探针序列：RPA等温扩增技术检测副溶血性弧菌》

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《RPA等温扩增技术检测副溶血性弧菌》

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从NCBI上下载包括ATCC17802在内的10条副溶血性弧菌的irgB（铁调节毒力监管蛋白基因）基因序列（genebank号分别为:CP013826.1、CP009982.1、CP011884.1、CP014046.1、CP006004.1、CP007004.1、CP003972.1、CP009765.1、CP020427.1、BA000031.2），通过DNAman比对分析副溶血性弧菌的保守序列，10条序列的同源性为99.27%。对保守序列按照RPA twist exo设计原则进行探针设计:RPA-exo荧光法探针长46～52 bp，在第30个碱基附近的两个T碱基上分别用一个荧光报告基团（FAM-d T）和淬灭基团（BHQ-d T）取代该T碱基。在两个T碱基之间添加一个脱碱基位点（d Spacer）取代所在位置碱基，探针5'端离dSpacer脱碱基位点至少30个碱基，3'端离d Spacer脱碱基位点至少15个碱基，同时3'端用C3-spacer修饰进行封闭。上下游引物以探针所在位置为基准，前后移动约5 bp碱基左右，依次构成相应的上游引物F1～F4，及下游引物R1～R4。将选定好的引物探针在NCBI上进行Blast以验证其特异性。引物探针列表见表3，并交由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。