《表1 目的基因检测所用引物Tab.1 Primers for test of the target genes》

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《百合转P5CS-F129A基因的遗传稳定性和耐旱性检测》

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取生长于温室的各株系叶片100 mg，使用EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒（RN38，艾德莱生物，北京）提取植物总RNA（操作方法详见说明书），并测定所得RNA浓度与纯度。使用1μg总RNA通过Rever Tra Ace q PCR RT Master Mix with g DNA Remover（FSQ-301，Toyobo，日本）进行第一链c DNA合成。使用Veriti 96-Well Thermal Cycler进行逆转录PCR（RT-PCR），所用检测引物如表1所示。PCR扩增体系为20μL，含0.4μL模板c DNA、0.3μmol/L各引物、0.1μL Go Taq DNA Polymerase（M3001，Promega，美国）、0.4μL PCR Nucleotide Mix，扩增程序为:95℃、2 min；随后95℃、0.5 min，65℃、2 min（P5CS）或1 min（bar）共35个循环，最后延伸5 min。以质粒p BPC-P5CS-F129A为模板的为阳性对照，普通‘索邦’c DNA为阴性对照，dd H2O为空白对照。PCR扩增结束后经1.0%琼脂糖凝胶电泳，在Gel Doc XR凝胶成像系统下观察结果。