《表1 各免疫因子及管家基因的引物序列Tab.1 The primers of each immune factors and house-keeping gene》

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《免疫因子FoxP3、CCL22和CCR4在宫颈癌微环境中的调节作用》

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注:Fox P3:叉头蛋白3；CCL22:趋化因子配体22；CCR4:CC趋化因子受体4；GAPDH:磷酸甘油醛脱氢酶。Note:Fox P3:Forkhead box P3.CCL22:Chemokine（C-C motif）ligand 22.CCR4:CC chemokine（C-C motif）receptor 4.GAPDH:Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase.

用TRIzol法提取组织中的总RNA，在核酸蛋白定量仪上测定RNA样品的浓度。取2μg总RNA，反转为c DNA。PCR所需的引物序列见表1。实时定量PCR扩增，反应体系为10μl，引物浓度为0.4μmol/L。扩增条件:95℃预变性30 s，1个循环；95℃变性5 s，60℃退火30 s，共40个循环。每个体系取3个复孔测试取平均值为Ct值，按2-△△Ct计算各因子的相对表达量。TRIzol试剂（life，15596-026，USA），反转录试剂盒Prime ScriptTMRT Master Mix（Ta Ka Ra，RR037A，Japan），实时定量PCR试剂盒SYBR Prime Ex TaqTMII（Ta KaRa，RR820A，Japan），Real-time PCR仪（C1000 Thermal Cycler，BIO-RAD，USA），核酸蛋白定量仪（Bio Photometer Plus，Eppendorf，Germany）。