《表1 副溶血性弧菌PCR检测目的基因引物序列》

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《食源性腹泻患者分离副溶血性弧菌毒力基因及药敏分析》

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采用热裂解法提取细菌DNA:挑取火柴头大小菌落溶于500μl灭菌水中，振荡10 s，100℃金属浴10 min，13 000 r/min 4℃离心10 min，上清液即为模板DNA。单重PCR （聚合酶链反应）进行tdh、trh、tlh、toxRS/new、orf8基因检测，多重PCR进行T3SS1、T3SS2α、T3SS2β基因检测。所有引物由上海生工股份有限公司合成，引物序列及大小见表1。反应体系:25μl体系，其中引物（2对，浓度为10μmol/L）各0.5μl，模板DNA 3μl，Taq酶12.5μl，用灭菌水补足到25μl。单重扩增程序:94℃预变性5 min，94℃45 s，55℃60 s，72℃1 min，30循环，72℃终延伸10 min。多重PCR扩增程序:94℃预变性5 min，94℃45 s，60℃45 s，72℃1 min，30循环，72℃终延伸10 min。取5μl扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，观察是否有对应长度的扩增条带。