《表1 不同HCV亚型NS5A基因片段扩增引物及PCR条件》

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《静脉注射吸毒者HIV-1/HCV共感染的HCVNS5A抑制剂天然耐药相关变异分析》

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2) NS5A基因序列扩增及分型：以cDNA为模板，参考实验室前期获得的基因亚型信息[11]，采用巢式聚合酶链式反应（PCR）的方法分别对7个亚型样本的NS5A基因片段（H77:6258-7602）进行扩增。第一轮反应体系为25μL采用Takara公司TaKaRa Ex Taq试剂；提取第一轮反应产物5μL为模板，进行第二轮扩增，采用Tiangen公司的2×Taq PCR MasterMix试剂。不同HCV亚型的引物和PCR反应条件见表1。第2轮PCR产物经2%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，扩增成功的样品送北京擎科公司纯化测序。获得的NS5A序列用Mega 6.0软件构建Neighor-joining (NJ）系统进化树确认分型。