《表1 qRT-PCR引物序列及片段大小与其扩增条件》

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《热应激对猪睾丸死亡受体Fas及其配体FasL表达与定位的影响》

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各试验组猪睾丸总RNA由Trizol（Invitrogen，USA）法提取，1%琼脂糖凝胶电泳法检测其在睾丸组织是否表达完整，采用ND-1000浓度仪测定总RNA浓度。c DNA由反转录试剂盒（TAKARA，中国）合成，按照产品说明书标注的反应体系进行基因组DNA去除，在200μL的EP小管中加入并混匀2μL DNA Wipeout Buffer（7×）以及1μg总RNA，反应体系为14μL，将EP管常规放入PCR仪，并设定42℃恒温条件反应2 min；反应结束后，c DNA合成，反应体系为:继续在小管中加入并混匀4μL Quantiscript RT Buffer（5×），1μL RT Primer Mix，1μL Reverse-transcription master mix以及14μL Total RNA，将EP管常规放入PCR仪，设定加热反应条件:42℃，30 min；95℃，3 min；4℃冷却。c DNA模板于-80℃保存。Fas，FasL基因的CDS序列以NCBI提供的Sus scrofa m RNA全序列为标准，使用Primer 5.0软件设计并通过华大基因公司合成qPT-RCR扩增引物（表1）。