《表1 qRT-PCR引物序列及扩增片段大小》

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《内生真菌对铁皮石斛多糖和生物碱合成关键酶基因表达的影响》

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根据已克隆的铁皮石斛关键酶UGPase（JX294909.1）、HMGR(JX909333.1）、FPS(JX679465.1）基因序列，利用Primer premier 5.0设计q RT-PCR特异性引物（表1），以18 S rRNA为内参基因[19]，进行荧光定量表达分析。q RT-PCR反应总体系20μL，其中，SYBR?Premix Ex TaqTMII(Ta Ka Ra）10μL，上、下游引物各1μL，c DNA模板1μL，dd H2O 7μL。除模板外先将其他成分混匀，分装后加入模板。所有操作均在冰浴上完成。q RT-PCR反应条件：95℃预变性1 min，95℃变性10 s，58℃退火10 s，72℃延伸10 s，40个循环。反应结束后进行熔解曲线分析，以鉴定PCR产物的特异性。