《表1 PCR引物序列及扩增片段大小》
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《肠炎沙门菌sipC缺失株构建及部分生物学特性分析》
P1、P2下划线:与sipC基因两翼序列互补序列;P3、P4下划线:酶切位点P1,P2 underline:Complementary sequence with both wings of sipC gene;P3,P4 underline:Restriction site
利用软件Primer Premier 5.0,根据NCBI已发布的肠炎沙门菌P125109中sipC序列设计sipC基因及上、下游同源臂,引物P1、P2用于扩增同源重组序列(3'端未加下划线的序列与质粒pKD3上氯霉素抗性基因cat两侧序列互补,5'端加下划线的序列分别与sipC基因两翼序列互补),λRed同源重组方法参照本室之前发表论文(姚丰华等,2014)。以MY1野生株为模板,引物P3、P4用于扩增sipC基因,经测序验证后克隆至表达载体pBR322(具有氨苄青霉素抗性)中,酶切位点为NdeⅠ和PstⅠ;然后将重组质粒pBR322-sipC转化到MY1ΔsipC中,获得携带sipC基因的回补株MY1ΔsipC/psipC。引物由上海生工生物工程有限公司合成,序列见表1。
图表编号 | XD0038776700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.02.25 |
作者 | 张钰、陈阳、徐琪、朱国强、陈国宏 |
绘制单位 | 扬州大学动物科学与技术学院、扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室、扬州大学动物科学与技术学院、扬州大学动物科学与技术学院、扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室、扬州大学动物科学与技术学院 |
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