《表6 CDS, SNP, qRT-PCR引物序列信息及PCR扩增条件》

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《西藏绒山羊KAP9.2基因CDS克隆、外显子区多态性及表达分析》

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以反转录的cDNA为模板，参照GenBanK已发表山羊KAP9.2（登录号:XM＿018065084.1）mRNA序列，利用Primer5.0设计引物，扩增完整的编码区，引物序列及特征（表6）。PCR反应体系10μL，其中cDNA模板2μL，2×KOD Buffer 5μL，2 mmol/L dNTP 2μL，上下游引物（10 pmol/μL）各0.3μL，0.2μL KOD FX酶，0.2μL DEPC-H2O。扩增条件为94℃预变性2 min，98℃变性10 s，56℃退火30 s，68℃延伸2 min，循环数为36，68℃充分延伸10 min。扩增结束，产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，将效果好的样品连接克隆载体pTA2，经转化、筛菌鉴定，送至成都擎科梓熙生物技术有限公司进行测序。