《表1 qRT-PCR扩增引物序列》

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《糖尿病伴骨质疏松患者血清微小RNA-210胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达及临床价值》

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采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测血清miR-210水平，总RNA提取:取待测血清解冻，加Trizol 1 m L，提取总RNA，操作步骤严格按照试剂盒说明书执行，紫外分光光度计检测RNA浓度和纯度；cDNA合成:冰盒上解冻试剂，配制反应体系；反应体系:总RNA 1μL、Olig（dT）181μL、dNTP mix 1μL、5×RT Buffer 2μL、RNase Inhibitor 0.5μL、THERMOscript H-RTase 1μL、RNase free H2O 13.5μL；反应条件:45℃30 min，85℃5 min；qRT-PCR:PCR Mix 10μL、Forward Primer 0.5μL、Reverse Primer 0.5μL、cDNA模板2μL、RNA free H2O 7μL；反应条件:95℃5 min，95℃10 s，60℃20 s，72℃10 s，设置3个重复，40个循环，进行PCR扩展，采用2-ΔΔCT方法计算miR-210相对表达量，引物序列见表1。