《表1 qRT-PCR引物序列》

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《LncRNA Neat1在肝细胞癌组织和细胞株中的表达及临床意义》

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注：LncRNA为长链非编码RNA，GAPDH为甘油醛-3-磷酸脱氢酶

采用qRT-PCR法。采用Trizol法提取LO2、MHCC97-H、MHCC97-L细胞株以及16例肝细胞癌患者癌组织及其癌旁正常组织的总RNA，采用核酸分析仪检测所提取RNA的浓度和纯度，取适宜纯度（1.8～2.0）的RNA进行逆转录反应。将RNA逆转为C-DNA，并以其为模板进行qRT-PCR，反应体系20μl（包括上下游特异性PCR引物各0.3μl、cDNA模板1μl、灭菌超纯水8.4μl、SYBR Green I qPCR Master Mix10μl；反应条件：50℃2 min，95℃10 min，95℃15 s，60℃1 min，共40个循环。Neat1的引物根据美国生物技术信息中心已发表的LncRNA Neat1序列设计，并由生工生物工程（上海）公司合成，引物序列见表1。采用2-ΔΔCt法计算LncRNA Neat1相对表达量。