《表1 qRT-PCR引物序列》

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《LncRNA-GAS5在食管鳞癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响》

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采用qRT-PCR法测定人食管鳞癌细胞株EC9706中LncRNA-GAS5相对表达量。取上述处理后细胞，按照Trizol试剂盒说明书操作提取细胞总RNA，按照Bio Rad逆转录试剂盒操作步骤将2μg RNA反转录为c DNA，之后按照SYBR Green RCR master mix试剂说明配反应体系并加样。qRT-PCR反应体系共为20μl:SYBR Premix Ex TaqⅡ（2×） 10μl，c DNA 2.0μl，上下游引物各0.8μl，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.4μl，dd H2O 6.0μl。完成后将其放入荧光定量PCR仪上进行反应，程序设定为:95℃预处理30 s，95℃15 s，60℃30 s，72℃15 s，以上3个步骤共循环40次。LncRNA-GAS5以GAPDH[生工生物工程（上海）股份有限公司]为内参基因，引物设计详见表1。通过2-ΔΔCt算法计算LncRNA-GAS5相对表达量。