《表1 qRT-PCR引物序列》

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《印楝种子粗提物诱导烟草炭疽病抗性的生理效应》

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利用SYBR Premix Ex Taq kit（TaKaRa）在TP900 Thermal Cycler DiceTM Real Time System（TaKaRa）上进行qRT-PCR检测，利用Premier 5.0设计特异性扩增引物（表1），由上海博尚生物技术有限公司合成。反应体系25.0μL:2×SYBR Premix Ex Taq 12.5μL，10.0μmol/L正、反向引物各0.5μL，cDNA模板2.0μL，ddH2O 9.5μL。扩增程序:95℃预变性5 min；94℃1 min，60℃1 min，72℃2 min，进行40个循环；72℃延伸10 min。在每一个循环的退火阶段收集荧光进行实时检测，反应结束后，得到含有所有标本的记录点曲线。最终显示的数据通过2-ΔΔCt方法，以β-actin为内参基因。对于每个样品，将两个相对独立的反转录反应合并在一起，所有的qRT-PCR检测均依据相同的合成cDNA。每次试验进行3次技术重复和3次生物学重复。