《表1 巢式PCR扩增引物及片段长度》

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《三个城市部分HIV感染者抗病毒治疗前耐药状况调查》

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2）巢式聚合酶链式反应（PCR）及基因测序：采用巢式PCR，针对高度保守序列pol基因反转录酶/蛋白酶区和整合酶区分别进行扩增，扩增引物详见表1，反应体系详见表2，扩增反应条件为：第一轮：50℃反转录30min；94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，40次循环；72℃延伸8min；4℃保温。第二轮：94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，40次循环；72℃延伸8min；4℃保温。将第二轮PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，条带大小确定后进行脱氧核糖核酸（DNA）纯化并送至苏州金唯智公司测序，测序引物分别使用第二轮PCR中正义链引物。使用斯坦福大学HIV耐药数据库(http://hivdb.stanford.edu/）对测序结果进行序列比对，并根据斯坦福网站评分标准将HIV-1对每种抗反转录病毒药物的耐药程度分为5个等级：敏感、潜在低度耐药、低度耐药、中度耐药和高度耐药，计算低度以上耐药率并分析不同扩增区域的耐药相关突变特点。