《表1 PCR测序引物:IL-28B基因多态性在丙型肝炎患者中的分布及临床意义》

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《IL-28B基因多态性在丙型肝炎患者中的分布及临床意义》


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采用全血基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物技术有限公司)提取全基因组DNA,DNA的提取步骤按照试剂盒说明书提取。纯度检测合格,置于-80℃冰箱保存备用。在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行实时荧光定量聚合酶链反应。根据IL-28B的rs12979860和rs12980275基因位点,由上海天昊生物科技有限公司设计PCR引物并合成(见表1)。PCR反应体系为25μl:DNA提取液1μl,2×Master Supermix Taq酶12.5μl,上下游引物各1μl,ddH2O 9.5μl。反应条件:95℃热变性5 min,95℃变性30 s,58℃退火30 s,72℃45 s,共35个循环,72℃延伸7 min,4℃保存。将PCR产物送至上海生工测序公司对产物进行测序,测序结果利用MEGA 4.0软件进行序列比对判定基因型。