《表1 GLB1基因突变位点的Sanger测序引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《GM1神经节苷脂沉积病致病基因GLB1新变异c.101T>C(p.Ile34Thr)的识别和致病性分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

提取患儿及其父母的外周血DNA，根据二代测序检测结果，对患儿及其父母的DNA标本进行GLB1基因突变的Sanger测序验证。根据GLB1基因的DNA序列，使用Primer Premier 5.0软件设计聚合酶链反应引物（表1，北京迈基诺基因科技股份有限公司合成）。聚合酶链反应体系为:2×Goldstar Buffer Mix 10μL，上下游引物各1μL，DNA 1μL（10μmol/L），最后加灭菌双蒸水7μL，共20μL。95℃预变性10 min；随后分为4步，第1步:94℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸45 s，共3个循环；第2步:94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸45 s，共5个循环；第3步:94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，共10个循环；第4步:94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸45 s，共17个循环；最后72℃延伸5 min。聚合酶链反应产物经琼脂糖凝胶电泳切胶纯化，送北京迈基诺基因科技股份有限公司进行测序。测序结果用Chromas软件进行分析，并应用DNAMAN软件与基因组GLB1-201参考序列进行比对（Ensemble Genome Browser:http://asia.ensembl.org/Homo sapiens/Transcript/Exons?db=core；g=ENSG0000017026；r=3:32996608-33097230；t=ENST00000307363）。