《表1 各SLC25A13基因突变位点的PCR扩增引物及荧光/淬灭探针》

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《希特林蛋白缺乏症实时荧光PCR解链曲线快速基因分型的建立与应用》

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注:F，正向引物；R，反向引物；PF，荧光标记探针（PF-W，野生型探针；PF-M，突变型探针）；PQ，淬灭探针。

参照本课题组的实时荧光PCR解链曲线基因突变检测通用技术方案及技术发明专利[10-11]，根据SLC25A13基因（NC＿000007.14） DNA序列中c.851-854del GTAT、c.1638-1660dup23、IVS6+5G>A突变位点所在位置，分别设计相应的PCR扩增引物、荧光标记及对应淬灭探针。其中，针对2种突变类型分别采用不同的荧光标记探针设计方案:针对c.851-854del GTAT、IVS6+5G>A等In/Del或点突变类型，以突变位点野生型或突变型的互补DNA序列为探针，利用探针与野生型和突变型的杂交/解链温度差异而实现检测目标；针对c.1638-1660dup23等片段插入或缺失突变类型，则分别设计Tm值不同的野生型和突变型探针。PCR扩增引物及荧光/淬灭探针见表1，均由上海生工生物公司合成。