《表1 HBV S区基因扩增和测序引物》

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《乙型肝炎病毒S区基因突变对乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者预后的影响研究》


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注:HBV=乙型肝炎病毒

采集肝癌组织标本置于-80℃冰箱保存,应用Promega公司DNA试剂盒,经过细胞核裂解、RNA降解、蛋白沉淀、离心、纯化等步骤提取基因组DNA,并置于-20℃冰箱保存。通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/5536)查找引物(见表1)。对HBV S区的DNA序列进行PCR扩增,采用美国Promega公司的PCR无色体系预混试剂盒,使用美国基因有限公司PCR仪(AS Applied Biosystems9902)进行目的基因扩增。其产物应用Life Technologies公司的ABI 7300 TaqMan平台,通过多重PCR法测出HBV-HCC患者肝癌组织的HBV基因型,并进行循环测序及分析。为确保测序的准确性,对同一个样本应用双向重复测序方法,以明确HBV S区基因的突变位点。