《表1 用于基因表达分析的引物序列》

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《茶树花Cu/Zn-SOD酶活性及其基因表达分析》

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以反转录产物为模板，用基因专一性引物[22]（表1）进行相关基因的荧光定量分析。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，q RT-PCR）选取GAPDH作为内参基因[23]进行校正。qRT-PCR方法参照SYBR Premix Ex TaqTM(Ta KaRa）试剂盒。总体系20μL﹕10μL SYBR Premix Ex Taq(2×）、10μmol/L上引物和下引物各0.4μL、ROX Reference Dye(50×）0.4μL、2μL cDNA、加无菌水补足至20μL。反应在荧光定量PCR仪（ABI stepone plus）上进行。扩增程序为：95℃预变性1 min；95℃变性15 s，58℃退火25 s，共45个循环，最后从55～95℃记录溶解曲线。通过分析溶解曲线，确定扩增产物为单一PCR产物。样品和内参分别重复3次。采用2-ΔΔCt方法进行基因表达水平分析。