《表1 基因表达分析引物序列》

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《‘金叶’弯刺蔷薇叶绿体结构、叶绿素合成物质含量及相关基因表达分析》

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叶片总RNA的提取依照天根生化科技（北京）有限公司RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒说明书进行，微量分光光度计（Nanodrop 2000，Thermo Scientific，USA）测定RNA浓度，1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量及完整性。依照天根生化科技（北京）有限公司Fast Quant cDNA第一链合成试剂盒说明书合成cDNA第一链。参考‘金叶’弯刺蔷薇转录组测序Unigene库中谷氨酰–tRNA还原酶基因（RbHEMA）、谷氨酸酯–1–半醛2，1氨基变位酶基因（RbGSA）、δ–氨基酮戊酸脱水酶基因（RbHEMB）、胆色素原脱氨酶基因（RbHEMC）、尿卟啉原Ⅲ脱羧酶基因（RbHEME1/RbHEME）、镁螯合酶Ⅰ亚基基因（RbCHLI）的序列设计qRT-PCR引物（表1）。采用相对定量的方法，以Rbα-Tubulin为内标基因，测定上述基因在叶片中的表达量。反应体系为20μL:SYBR?Green qPCR Master Mix 10μL，正、反引物各0.4μL，cDNA 2μL，ddH2O补至20μL。反应在C1000 Touch实时定量PCR仪（Bio-Rad，USA）上进行，95℃预变性30 s，95℃变性7 s，55℃退火30 s，72℃延伸15 s，40个循环，55℃时采集荧光信号，反应结束后分析荧光值变化曲线及熔解曲线。使用2-??CT法（Livak&Schmittgen，2001）计算相对表达量。每个反应设置3个生物学重复，使用独立样本t检验法进行差异显著性分析。