《表1 用于基因克隆与表达分析的特异性引物》

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《中国南瓜CmHSP90基因的克隆及其在逆境胁迫下的表达分析》

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采用Primer Premier 5.0软件设计基因的开放阅读框（open reading frame，ORF）引物（表1），以中国南瓜幼苗总RNA反转录第1链c DNA为模板进行RT-PCR扩增。扩增体系为:100 ng模板c DNA 1μL，0.4μmol/L正反引物各1μL，0.15 mmol/L dNTP 0.5μL，1 U Taq DNA聚合酶0.2μL，1.5 mmol/L 10×PCR缓冲液2.5μL，加入灭菌的超纯水至25μL。扩增条件为:94°C预变性3 min；94°C变性30 s，58°C退火30 s，72°C延伸60 s，35个循环；72°C延伸10 min。PCR产物用1%的琼脂糖电泳进行检测，经过回收纯化并连接p MD19-T载体，转化大肠杆菌DH5α，PCR检测后送至测序。测序结果进行拼接，分别获得2个HSP90基因的ORF全长。