《表1 引物序列：沙柳SpsTAC2基因克隆、生物信息学及组织特异表达分析》

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《沙柳SpsTAC2基因克隆、生物信息学及组织特异表达分析》

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通过拟南芥信息资源（TAIR）数据库搜索到拟南芥（Arabidopsis thaliana）TAC1基因（AT2G46640.3）的氨基酸序列，在数据库（Phytozome v11.0）中进行比对，由红皮柳（Salix purpurea）基因组中获得位于第二条染色体的同源序列SapurV1A.0003s0820，以该红皮柳序列为准，在其保守的UTR区设计加有attB接头的特异性引物Salix-F与Salix-R（表1），以cDNA为模板，用TransStartFastPfu高保真酶进行基因序列扩增。PCR扩增程序为94℃3 min，（94℃30 s，58℃30 s，72℃1 min 10 s） 35个循环，72℃7 min，4℃保存。扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶中于130 V电压下进行电泳，切胶回收目标长度的条带，然后将该片段连入p DONR222质粒中，用热激法转化DH5α感受态细胞，用含有卡那霉素的LB培养基抗性筛选，并做菌落PCR检测，再对阳性菌落进行测序。