《表3 引物序列信息：大豆棉子糖合成酶基因生物信息学及表达分析》

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《大豆棉子糖合成酶基因生物信息学及表达分析》

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分别根据3个RS基因的c DNA序列设计实时荧光定量PCR引物，以大豆组成型表达基因β-Tubuin（Gen Bank登录号:GMU12286)为内参，4对引物序列送上海生工公司合成（表3）。在BIO-RAD CFX96Real-Time PCR仪上，对3个RS基因在高盐、干旱、低温和高温胁迫下表达量进行检测。实时荧光定量PCR反应体系如下：2×TB Green Premix Ex TaqⅡ(Ta Ka Ra）10μL、c DNA 2μL、Primer 1.6μL，补水至总体积20μL。反应程序如下：95℃预变性30 s；95℃5 s，58℃30 s，共循环40次。所有处理均做3次重复，采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。