《表1 引物序列：野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

分析野三七的转录组数据，筛选获得具有完整开放阅读框（open reading frame，ORF）的SE基因，根据ORF设计SE基因全长引物（表1）。以野三七根cDNA为模板进行PCR扩增，反应体系:5×Prime STAR Buffer 5μL，dNTP Mixture2μL，SE-F（10μmol·L-1）0.5μL，SE-R（10μmol·L-1）0.5μL，cDNA 1μL，Prime STAR HS DNA Polymerase 0.25μL，ddH2O补足到25μL。反应程序:94℃预变性5 min；98℃变性10 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，进行35个循环；72℃延伸10 min。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，对目的片段进行切胶回收。回收的PCR产物连接载体pEASY-Blunt后转化Trans-T1感受态细胞，于含氨苄（100 mg·L-1）的LB平板上37℃培养12～16 h。挑取单克隆进行菌落PCR验证，阳性结果送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。将阳性且测序无误的重组质粒命名为pEASY-Blunt-PvfSE。