《表1 引物序列：杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化》

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《杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化》

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注:下划线代表限制性酶切位点

根据实验室前期杜仲基因组测序结果设计特异性引物（表1），将提取的杜仲总RNA反转录为c D-NA作为模板，用Platinum Tag DNA Ploymerase High Fidelity酶进行序列扩增，按说明书建立PCR体系：ddH2O 31.8μL，10×High Fidelity PCR Buffer缓冲液5.0μL，上下游引物各1.0μL，dNTPs Mixture 4.0μL，cDNA 5.0μL，Platinum Tag DNA Ploymerase High Fidelity酶0.2μL。反应程序为：94℃2 min；94℃15 s，62℃30 s，68℃1 min，35个循环；68℃5 min；4℃保存。用胶回收试剂盒将PCR产物进行胶回，并将回收产物连接到克隆载体p MD20-T上。目的片段与T载体连接后转化到E.coli DH5α感受态细胞中，在含100 mg/L Amp的LB固体培养基上进行筛选，挑取白色单菌落摇菌过夜，碱裂解法提取质粒，用质粒PCR鉴定出阳性质粒后送华大基因进行测序。将此基因命名为EuGT2。