《表1 实验所用引物：水稻OsERF103基因生物信息学分析、亚细胞定位及表达分析》

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《水稻OsERF103基因生物信息学分析、亚细胞定位及表达分析》

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*下划线部分为Eco31Ⅰ（BsaⅠ）识别位点；OsERF103：水稻乙烯响应因子103基因；UBQ5：泛素5基因；下同

根据OsERF103基因（GenBank No.XM＿015768788）cDNA序列设计克隆引物（表1），生工生物工程（上海）股份有限公司合成引物。以赛默飞cDNA第一链合成试剂盒SuperScriptTMⅢReverse Transcriptase反转录获得的水稻cDNA为模板，用高保真酶PrimeSTAR?Max DNA Polymerase进行PCR扩增。扩增片段切胶回收后连入pBWA（V）HS-ccdb-GLosgfp载体。酶切连接体系（20μL）:8μL H2O，2μL Buffer，1μL Eco31Ⅰ（BsaⅠ），1μL T4DNA ligase，4μL pBWA（V）HS-ccdb-GLosgfp和4μL OsERF103扩增产物。反应条件：37℃，20 h。将5～10μL连接产物转化入大肠杆菌（Escherichia coli）Top10感受态细胞，涂于含50μg/mL卡纳霉素的LB平板上，37℃恒温培养箱中培养过夜后进行菌斑PCR鉴定。挑取3个阳性克隆摇菌并送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，测序引物为35seq-s。构建成功的重组载体命名为pBWA（V）HS-OsERF103-GLosgfp。