《表1 引物序列：巴西橡胶树橡胶转移酶激活因子HbRTA的克隆、表达及定位》

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《巴西橡胶树橡胶转移酶激活因子HbRTA的克隆、表达及定位》

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利用Bioteke公司的RNA提取试剂盒（TRIpure总RNA提取试剂）提取橡胶树不同组织样品总RNA。c DNA的合成参照Fermentas公司的Revert Aid TM First Strand c DNA Synthesis Kit （K1622）反转录试剂盒说明书。橡胶树基因组DNA通过CTAB法提取（安泽伟和黄华孙，2005）。利用软件Primer Premier 5.0设计特异性引物2对，Hb RTA-F和Hb RTA-R （表1），基因组克隆引物Hb RTA-GF和Hb RTA-GR （表1），以橡胶树胶乳c DNA为模板对Hb RTA基因的ORF全长进行克隆。PCR反应条件为：95℃4 min，98℃10 s，56℃15 s，72℃15 s，35个循环，72℃10 min。PCR产物经凝胶电泳回收后连接p MD-18T Vector （Ta Ka Ra），并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α，在平板上培养几天后挑取阳性克隆进行测序分析。