《表1 引物列表:日本结缕草ZjNAC2转录激活验证及互作蛋白的初步筛选》

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《日本结缕草ZjNAC2转录激活验证及互作蛋白的初步筛选》


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将诱饵载体pG-BKT7-ZjNAC2+pGADT7-cDNA文库及阳性对照pGBKT7-53+pGADT7-T、阴性对照pGBKT7-lam+pGADT7-T分别共转化Y2HGold酵母感受态细胞中,涂布于SD/-Trp-Leu固体培养基上,30℃下培养2~3天。阳性对照pGBKT7-53+pGADT7-T和阴性对照pGBKT7-lam+pGADT7-T分别转化酵母感受态细胞,涂布于SD/-Leu-Trp固体培养基上。挑取单克隆菌落在SD/-Leu-Trp-His-Ade/X-α-Gal或SD/-Leu-Trp-His-Ade固体培养基中划线培养2~3天。挑取阳性克隆的菌落于YPDA中培养,以AD-R/T7-F为引物对阳性菌落进行PCR检测,反应程序为95℃10 min;95℃30s,55℃30s,72℃60s,40个循环;72℃5min,12℃保温。经凝胶电泳鉴定后有条带的PCR产物送睿博兴科生物技术有限公司(北京)测序,确定候选基因。