《表1 PCR引物列表：甘蓝型油菜钙依赖蛋白激酶6(BnaCPK6)的定位与互作蛋白分析》

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《甘蓝型油菜钙依赖蛋白激酶6(BnaCPK6)的定位与互作蛋白分析》

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将BnaCPK6全长通过高保真酶Pfu（Bioer，杭州）介导的PCR，亚克隆构建到pYJGFP上（表1）。然后，将BnaCPK6-p YJGFP通过冻融法转化到农杆菌GV3101中。质粒转化到农杆菌GV3101后，进行菌落PCR验证，验证正确后的农杆菌过夜摇菌。4000g离心收集菌体，弃上清后用含有乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）渗透介质（10 mmol/L MES-KOH，10 mmol/L Mg Cl2，0.15 mmol/L AS）重悬，浓度的OD值介于0.7～0.8之间。各组菌液混合好以后，在加入等比例的P19 AS重悬菌液。混匀好的菌液避光室温下孵育3 h后，用1 mL注射器注射到28 d大的本氏烟草下表皮。注射后的本氏烟草放回温室继续培养48 h，撕取注射点下表皮叶片制作成临时水装片在激光共聚焦显微镜下（LSM510meta）观察GFP的表达情况。