《表1 引物序列：分泌型cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞增殖相关基因表达的调控》

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《分泌型cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞增殖相关基因表达的调控》

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将汇合度达70%左右的HGC-27和AGS细胞消化后接种于6孔板，分为2组:对照组和GST-PKGⅡ（100μg/L）+8-pCPT-c GMP（250μmol/L）组。待细胞汇合度达到70%时，换无血清培养液饥饿处理8～12 h；弃上清液，无菌PBS清洗；加入相应浓度药物处理4 h。提取总RNA，逆转录为cDNA用于qRT-PCR。PCR反应体系:2×SYBR GreenⅠ预混试剂5μL，前引物（5μmol/L）0.4μL，后引物（5μmol/L）0.4μL，模板1μL，加双蒸水将体系总体积调整至10μL。反应条件:95℃预变性5 min；95℃变性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40个循环。用2-ΔΔCt法计算候选基因的相对表达量，实验重复3次。qRT-PCR所用引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，引物序列见表1。