《表1 引物序列及参数：维生素A对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响》

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《维生素A对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响》

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F:上游引物；R:下游引物。F:forw ard prim er；R:reverse prim er.

以磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）作为内参基因，采用实时荧光定量PCR仪（ABI-7500，ABI公司）测定细胞内乳脂、乳蛋白合成相关基因的表达量。测定基因主要包括乳脂合成相关基因脂肪酸合成酶（FASN）、乙酰辅酶A羧化酶（ACACA）、脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、脂蛋白酯酶（LPL）、脂肪酸结合蛋白3（FABP3）、固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）、过氧化酶体增殖物激活受体γ（PPARG），乳蛋白合成相关基因αs1-酪蛋白（CSN1S1）、β-酪蛋白（CSN2）、κ-酪蛋白（CSN3）、真核起始因子4E（e IF4E）、真核起始因子4E结合蛋白1（4EBP1）、雷帕霉素靶蛋白（m TOR）、p70核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）、信号传导和转录激活因子5（STAT5），其引物序列及参数见表1。反应程序为:95℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸20 s，进行40个循环；72℃延伸7 min；熔解曲线为:70~95℃，每6 s升温0.5℃，共51个循环，基因的表达量采用2-△△Ct法进行计算。