《表1 引物序列及参数:不同浓度亚油酸对二维和三维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及乳蛋白合成相关基因表达的影响》

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《表1 引物序列及参数:不同浓度亚油酸对二维和三维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及乳蛋白合成相关基因表达的影响》
《不同浓度亚油酸对二维和三维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及乳蛋白合成相关基因表达的影响》

BM EC中总RNA的提取采用RNAiso plus试剂盒(TaKaRa,日本)按说明书进行。用紫外分光光度计在260和280 nm处对RNA进行定量和定性测定。采用1.5%琼脂糖凝胶水平电泳测定RNA完整性。cDNA的合成按照PrimeScriptRT reagent Kit w ith gDNA Eraser试剂盒(TaKaRa,日本)说明书进行。实时荧光定量PCR反应按照试剂盒SYBR Premix Dimer EraserTM进行操作,其扩增条件为:95℃,30 s;95℃,5 s;60℃,30 s,共40个循环;95℃,15 s;60℃,30 s;95℃,30 s。本试验以泛素表达转录因子(UXT)、线粒体核糖体蛋白L39(MRPL39)、真核翻译起始因子3亚基K(EIF3K)为内参基因,分别检测乳蛋白合成相关基因[CSN1S1、κ-酪蛋白(CSN3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、真核翻译启始因子4E结合蛋白1(EIF4EBP1)、信号转导转录激活因子5(STAT5A)、核糖体p70s6激酶(RPS6K1)]的表达,各基因表达量用2-△△Ct值表示。引物序列及参数见表1。

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