《表1 引物序列：A型激酶锚定蛋白2基因表达对生长板软骨细胞功能的影响》

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《A型激酶锚定蛋白2基因表达对生长板软骨细胞功能的影响》

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（1）将复苏后的人源GPCs使用含有10%FBS的DMEM培养基在37℃、5%CO2培养箱中培养48h；(2）弃去培养基，PBS洗涤，0.25%Trypsin-EDTA消化，加入完全培养基终止消化，将细胞悬液调整为5×104个/ml；(3）在6孔板中每孔加入1ml细胞悬液，置于37℃培养箱中过夜培养；（5）将悬液调整为5×105个/ml，随机分为5组：AKAP2过表达阴性对照组（Vector组）、AKAP2过表达组（AKAP2 OE组）、AKAP2干扰阴性对照组（si-NC组）、AKAP2干扰组（siAKAP2组）和AKAP2 OE+U0126组（U0126为ERK1/2通路阻滞剂）；（6）A液：将待转染的Vector （9μg）、AKAP2 (9μg）、si-NC (300pmol）和si-AKAP2 (300pmol）分别用375μl无血清的Opti-MEM培养基稀释，混匀（每孔转染质粒3μg或si-RNA 100pmol）（引物序列见表1）；（7）B液：将36μl lipo3000用1.5ml无血清的Opti-MEM培养基稀释，混匀（每孔转染需3μl lipo3000)；(8）将5组375μl的A液分别与375μl的B液混合，混匀，室温静置5min；(9）将5组混合好的750μl转染液，以每孔250μl加入相应组中；（10）将培养板置入培养箱培养6h。