《表1 引物序列:热处理对下丘脑食欲调控和腺苷酸活化蛋白激酶信号通路相关基因表达的影响》

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《热处理对下丘脑食欲调控和腺苷酸活化蛋白激酶信号通路相关基因表达的影响》


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总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司;使用反转录试剂盒PrimeScriptTMRT Reagent Kit(Perfect Real Time,Code:DRR037A,TaKaRa)进行反转录,反转录条件为:55℃,30 min;85℃,5 min。各基因参照GenBank上已发表的序列,采用DNAMAN5.0设计(跨内含子),引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表1。RT-qPCR试剂盒(编号:DRR014A)SYBR Premix Ex TaqTM(Perfect Real Time)购自TaKaRa公司。两步法RT-qPCR反应条件为:95℃变性10 s,1个循环;95℃延伸5 s、60℃退火34 s,40个循环。以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参基因,各个目的基因的相对表达水平以2-△△Ct法进行计算。