《表1 各基因引物序列:辣木叶醇提物通过LXR-α/RXR信号通路调节ZDF大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达的研究》
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《辣木叶醇提物通过LXR-α/RXR信号通路调节ZDF大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达的研究》
6.检测指标(1)全自动生化仪检测大鼠血糖、血脂四项、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA),由北京中医药大学科研中心检测完成。(2)大鼠超敏ELISA试剂盒检测血清胰岛素(fasting insulin,FINS)水平。(3)根据空腹血糖及空腹血清胰岛素水平计算胰岛素敏感指数HOMA-IR、HOMA-IS。HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(m IU/L)/22.5;HOMA-IS=1/HOMA-IR=22.5/[FPG(mmol/L)×FINS(m IU/L)]。(4)RT-PCR检测大鼠肝脏LXR-α、RXR、SREBP-1c m RNA转录情况:RNA提取、反转录、PCR实验按照说明书进行,β-Actin为内参基因。内参及LXR-α、RXR、SREBP-1c引物序列见表1,检测结果用2-ΔΔCt法进行相对定量分析。(5)蛋白印迹法(Western Blot)检测大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达情况:40mg肝脏组织加入RIPA裂解液冰上研磨,提取组织蛋白,BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度。SDS-PAGE凝胶电泳,65V转膜2h,用5%脱脂奶粉室温摇床封闭1.5h,分别加入一抗SREBP-1c(1∶3 000)、β-Actin(1∶5 000),4℃过夜封闭,洗膜后加入二抗(1∶10 000),室温摇床孵育70min,超敏ECL发光液显色,于凝胶图像成像分析系统曝光,Image J软件计算条带灰度值。
图表编号 | XD00219265900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.08.01 |
作者 | 董笑克、刘铜华、洪明昭、秦灵灵、吴丽丽、丁雷、郭翔宇 |
绘制单位 | 北京中医药大学东方医院、北京中医药大学、中国科学院大学深圳医院内分泌科、北京中医药大学、北京中医药大学、北京中医药大学东方医院、北京中医药大学东方医院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |