《表1 PCR引物序列:力学刺激对软骨细胞Cdc42基因表达及表型的影响》

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《力学刺激对软骨细胞Cdc42基因表达及表型的影响》


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3.P0~P3代软骨细胞RT-PCR表型的鉴定:将培养的P0、P1、P2、P3代软骨细胞,细胞用0.25%胰酶消化,PBS洗2次,调整细胞量后加入1ml Trizol提取细胞总RNA。PCR反应体系为:10×PCR buffer5μl,上下游引物各1μl,cDNA模版1μl,10mmol/L dNTP1μl,ExTaq DNA聚合酶0.5μl,加入水至反应体系达50μl。反应条件为:上机94℃2min,55℃1min,72℃2min为第一步1个循环94℃45s,55℃40s,72℃1min,第二步35个循环72℃10min,4℃5min冷却后电泳。β-actin随目的基因的条件而扩增,PCR引物序列详见表1。