《表2 引物序列:长时间不同频率电刺激对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响》

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《长时间不同频率电刺激对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响》


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实时荧光定量RT-PCR。使用SYBRRPremix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)(货号:RR820A,Takara)试剂盒。按照试剂盒说明书要求配制20μL的反应体系,在Applied Biosystems7500Fast Real-Time PCR System仪器上进行定量分析。两步法PCR扩增标准程序:95℃预变性30 s;95℃5 s,60℃30~34 s的PCR反应设置40个循环;之后熔解曲线程序95℃15 s,60℃15 s,95℃60 s,并且用核糖体18S1 RNA作为内参基因校准。PGC-1α、My HCⅠ、My HCⅡa、My HCⅡx、My HCⅡb、Cyt C、IL-6和18S r RNA m RNA采用SYBR green方法进行检测。引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司,序列见表2,并且用18S r RNA进行内参基因校准。定量方法用2—△△Ct表示基因的表达量。计算公式为: