《表1 EPS方案：长时间不同频率电刺激对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响》

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《长时间不同频率电刺激对C2C12肌管细胞代谢指标和基因表达的影响》

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本研究使用仪器C-Pace EP culture pacer（IonOptix，Dublin，Ireland）产生EPS使肌管细胞收缩。此仪器能够发出双极性脉冲到悬挂在培养基中的C-dish碳电极上。EPS方案如下:EPS共持续4d，第1天和第2天:电压14V，单次刺激时长2ms，频率1Hz，电刺激总时间2h；第3天和第4天:电压30V，单次刺激时长2ms，频率分别为0.5 Hz、1 Hz、5 Hz和10 Hz，电刺激总时间3 h（见表1）。基于此，本研究实验细胞被分为5组:对照组（C组）、30V+2ms+0.5Hz组（0.5 Hz组）、30 V+2 ms+1 Hz组（1 Hz组）、30 V+2 ms+5 Hz组（5 Hz组）、30 V+2ms+10 Hz组（10 Hz组），其中C组为未进行电刺激组。每1组均包含6个孔的细胞作为检测对象（n=6）。EPS前1 h每孔更换2 m L新配分化培养基。EPS每天进行1次，共持续4 d。根据以往研究[14]，在最后一次EPS后3 h收集细胞提取总RNA进行MHC亚型、IL-6、PGC-1α、Cyt C等m RNA含量测试。另外，分别在最后一次EPS后即刻、12 h、24 h和36 h后收集细胞，使用裂解液后提取蛋白质和进行TG、ATP等含量的测试。