《表1 引物序列：下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及Wnt信号通路的影响》

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《下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及Wnt信号通路的影响》

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3.qRT-PCR检测细胞中mRNA的表达:收集各细胞系对数期细胞，用Trizol法抽提总RNA，紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。用反转录试剂盒反转录为c DNA，荧光定量PCR仪进行qRT-PCR检测各细胞系Tim-3 RNA相对表达量。SYBR Green法荧光定量PCR反应参数设置为95℃预变性2min，95℃变性15s，60℃退火20s，72℃延伸20s，共40个循环。以β-actin为内参基因。根据NCBI相应的序列，按照引物设计原则，采用Primer Premier5.0设计引物，由上海生工合成，引物序列如表1所示。