《表1 引物序列：壳聚糖/海藻酸钠水凝胶顺序释放BMP/WNT信号通路激活剂促成骨细胞分化的体外实验研究》

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《壳聚糖/海藻酸钠水凝胶顺序释放BMP/WNT信号通路激活剂促成骨细胞分化的体外实验研究》

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制备不载药的单纯材料、内载FK506+外载FK506、内载BIO+外载FK506、内载BIO+外载BIO和内载FK506+外载BIO 5种不同材料。每组加入10 m L H-DMEM培养液，充分浸泡，24 h后收集材料浸提液，之后每间隔3 d收集材料浸提液。将MC3T3-E1细胞以5 000个/孔的密度接种于6孔板中，24 h后换为成骨诱导液培养，加入不同材料浸提液，并设置不加材料浸提液的空白对照组，每3 d换液，分别于7、14 d进行ALP染色，21 d进行茜素红染色。14 d收集细胞，提取m RNA，采用RT-q PCR方法检测成骨相关基因Runx2、Sp7和OCN的表达。引物序列见表1。