《表1 PCR引物序列:黄芪提取液对糖尿病溃疡大鼠Wnt/β-Catenin信号通路调控表皮干细胞增殖分化的影响》

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《黄芪提取液对糖尿病溃疡大鼠Wnt/β-Catenin信号通路调控表皮干细胞增殖分化的影响》


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给药后第7、14、21天各组创面组织Wnt1、Wnt3a、β-连环素(β-Catenin)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)m RNA表达。按照总RNA提取试剂盒说明提取总RNA,分光光度计测定RNA浓度和纯度。Wnt1、Wnt3a、β-Catenin、GSK-3β、β-actin的PCR引物由上海基科生物化学有限公司设计合成,Wnt1、Wnt3a、β-Catenin、GSK-3β基因ID号分别为:24881、303181、84353、84027,引物序列见表1。运用逆转录试剂盒进行逆转录,得到c DNA原液。随后配制q Real-time PCR反应体系,以SYBRGreen法进行扩增,扩增程序为95℃5 min(预变性),之后95℃10 s(变性),55℃20s(退火),85℃20 s(延伸),40个循环扩增完毕。根据Real-time PCR原始检测结果,按照2-ΔΔCt相对定量计算公式,计算各样品组织中Wnt1、Wnt3a、β-Catenin、GSK-3βm RNA的相对表达量。