《表1 引物序列：高糖环境LIF介导STAT3/SOCS3信号通路参与成骨细胞分化机制研究》

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《高糖环境LIF介导STAT3/SOCS3信号通路参与成骨细胞分化机制研究》

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实时荧光定量RT-PCR反应检测成骨细胞被干扰后ALP、RUNX2、OCN和OPN的m RNA变化。具体步骤:TRIzol提取剂（Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO，USA）提取RNA，滴加1μL SUPERase·InTMRNase抑制剂（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA），利用OD260/OD280比定量检测。每份RNA样本的定量检测采用One Step RT-PCR试剂盒（Tak Kala biological，Tokyo，Japan），首先进行反转录（42℃，5 min，5℃，10 s），然后利用ABI PRISM 7900HT序列检测系统（Thermo Scientific，Rockford，USA）进行PCR反应（95℃反应5 s，60℃反应20 s，40个循环），利用溶解曲线分析特异性的扩增产物，利用2-ΔΔCt方法检测m RNA，其结果采用与磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）相对值表示，引物链（PCR引物由上海生工有限公司设计合成）见表1。