《表1 引物序列：金黄色葡萄球菌通过NF-κB信号对破骨细胞分化的影响及作用》

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《金黄色葡萄球菌通过NF-κB信号对破骨细胞分化的影响及作用》

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将RAW 264.7细胞以1×105细胞/孔的密度接种在6孔板中，并培养过夜。然后分别加入灭活的金黄色葡萄球菌（每个细胞的MOI为10∶1和40∶1 CFU）、金黄色葡萄球菌滤液（浓度为10μg/mL和20μg/mL），RANKL处理细胞（100 ng/mL）和PBS（对照）放置5 d；每3天更换1次。对于活的金黄色葡萄球菌感染，将细胞在不含抗生素的DMEM中培养，并用活的金黄色葡萄球菌（每个细胞的MOI为10∶1和40∶1 CFU）刺激24 h。在那之后，活的金黄色葡萄球菌用敏感的抗生素将其除去，并将细胞再培养4 h。在指定天数培养后，收获细胞，并根据说明书的程序用GeneJET RNA纯化试剂盒分离总RNA，并用NanoDrop 2000测量总RNA的浓度。使用带有g DNA橡皮擦的PrimeScriptTMRT试剂盒，通过反转录将500 ng的总RNA用于合成cDNA。实时PCR在CFX96实时系统与SYBR执行誖预混防爆的Taq TM。通过在94℃孵育5 min时开始反应，并进行PCR 94℃30 s，60℃（GAPDH为58℃），34 s和72℃30 s，30个循环（表1）；所有反应均重复3次。相对于GAPDH mRNA将测试基因的相对量标准化，并使用比较2-ΔΔCT方法表示标准化数据。