《表1 引物序列：柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应》

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《柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应》

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取对数生长期细胞，按照每孔细胞数5×103个接种于6孔板中，分为对照组（等体积的生理盐水），模型组（20μg/mL LPS），柚皮苷低、高剂量（20、40μmol/L）组，加入相应药物后孵育时间24 h。RNA提取试剂盒提取细胞总RNA，紫外分光光度计进行RNA定量，再对RNA进行逆转录得到对应cDNA，最后使用SYBR Green染料进行qRT-PCR反应，检测炎症因子转录情况。PCR反应体系为:2×SYBR green master mix10μL、上下游引物（10μmol/μL）各1μL、ddH2O 6μL、cDNA 2μL，总体积20μL。反应条件为:95℃30 s，95℃15 s，60℃30 s，共40个循环，最后做溶解曲线，95℃1 s，65℃15 s。PCR反应结束后，根据PCR获得的融解曲线和扩增曲线分析结果的可靠性并设定阈值，输出Ct值。取其Ct均值，以β-actin为内参校正，采用标准曲线法对目的基因的相对表达水平进行统计学分析。引物根据GenBank基因序列设计并合成肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素（IL）-1β、IL-6和IL-17基因引物。引物序列见表1。