《表1 引物序列：T-2毒素激活活性氧/核转录因子-κB信号通路诱导猪空肠上皮细胞发生炎性反应》

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《T-2毒素激活活性氧/核转录因子-κB信号通路诱导猪空肠上皮细胞发生炎性反应》

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细胞以2×105个/mL浓度接入6孔板，待细胞融合度达到80%，用T-2毒素和NAC溶液处理细胞12 h后，吸掉培养基，PBS清洗3次，每孔加1 mL Trizol，将细胞裂解下来，裂解液和细胞一起装入2 mL离心管，离心机离心（4℃，3 500 r/min，15 min）。取上清液放入新的2 mL离心管，加0.2 mL氯仿混匀静置5 min，放入离心机离心（4℃，12 000 r/min，15 min），取上清液放入新的2 mL离心管，与上清液等体积加入异丙醇，混匀静置10 min，离心机离心（4℃，12 000 r/min，10 min）。弃去上清，加入1 mL75%乙醇轻轻震荡洗涤沉淀，离心机离心（4℃，7 500 r/min，5 min）。弃去上清，将装有沉淀的离心管放入超净台，打开分机吹干沉淀，加入50μL焦碳酸二乙酯（DEPC）水溶解沉淀并用枪轻轻吹打均匀。测定细胞RNA浓度后，按照2×TS-INGKE Master Mix反转录试剂盒说明书对RNA进行反转录，获得cDNA；测得cDNA浓度后，将各样品cDNA浓度稀释到100 ng/μL，cDNA放于-20℃保存用于后续试验。按照2×T5 Fast qPCR Mix(SYBR Green I）试剂盒说明书加入各反应试剂，在实时荧光定量PCR仪上进行检测。试验数据采用2-△△Ct法进行相对定量计算，各个基因引物序列见表1。