《表1 引物序列表：基于Toll样受体4/核因子-κB信号通路研究莪术醇抗肝纤维化的分子机制》

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《基于Toll样受体4/核因子-κB信号通路研究莪术醇抗肝纤维化的分子机制》

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在细胞中加入1 ml Trizol试剂，用枪吹打混匀，移至无RNase的1.5 ml EP管中，裂解10 min，加入200μl氯仿，剧烈颠倒混匀数次，室温放置5 min，4℃以14 256×g离心15min。转移上层水相（约400μl）于另一新1.5 ml EP管中，加入400μl异丙醇，混匀后室温静置10 min。4℃以14 256×g离心10 min可见RNA沉淀。弃上清，加入无RNase的75%乙醇1 ml，涡旋混匀后，4℃以9900×g离心5 min。弃上清，干燥RNA沉淀5～10 min，将沉淀溶于20μl DEPC水中。在c DNA反应体系中将RNA转录成c DNA，反应条件为25℃5 min，50℃15 min，85℃5 min，4℃10 min，将得到的c DNA放入RT-PCR反应体系中，反应条件为50℃2 min，95℃10 min；95℃30 s，60℃30 s，40个循环。取PCR产物在琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像分析系统上成相，利用分析系统进行灰度扫描，得到光密度值（IOD），以GAPDH为内对照，TLR4和P65NF-κB上下游引物及长度见表1。