《表1 寡核苷酸序列表：NF-κB/COX-2信号通路在宫颈癌中的作用及机制研究》

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《NF-κB/COX-2信号通路在宫颈癌中的作用及机制研究》

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根据Genebank中COX-2序列（PTGS-2，NM＿000963）为模板选择3段靶序列：RNAi（1）5′-GCT-GAATTTAACACCCTCTAT-3′、RNAi（2）5′-CCATTCT CCTTGAAAGGACTT-3′、RNAi（2）5′-CCGGAATTTTT GACAAGAA-3′。同时设计RNAi阴性对照Scramble序列：5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′。再根据以上3段序列设计寡核苷酸序列，该序列中插入Age I、EcoR I酶切位点，每对寡核苷酸序列退火后可形成短发夹结构，其中发夹环为19个碱基组成的小片段DNA双链（表1）。聚合酶链式反应（PCR）鉴定阳性重组子后，送上海领科生物科技有限公司进行测序验证。利用慢病毒载体包装系统，然后共转染293T细胞，转染后8 h然后继续培养48 h后，收集细胞上清液。取对数生长期的Hela细胞，以5×104cell/孔接种于6孔板中，置入37℃5%CO2培养箱培养。细胞融合度达到约30%后加入适宜量的病毒，12 h后观察细胞状态：如果没有明显的细胞毒性作用，继续培养24 h后更换培养基；如果有明显的细胞毒性作用，立即更换培养基，感染3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。