《表1 引物序列：NF-κB-iNOS mRNA-NO信号通路在糖尿病痛性神经病变中的作用》

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《NF-κB-iNOS mRNA-NO信号通路在糖尿病痛性神经病变中的作用》

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采集各组外周血约5 ml，参照说明书采用Trizol法（Trizol试剂由英雄捷基上海贸易有限公司提供）提取外周血单个核细胞总RNA；逆转录反应（试剂盒由北京罗氏公司提供）：提取总RNA样品，调制20μl反应体系（总RNA，2μl，Random Hexamer Primer，1μl，RNase Free d H2O，10μl，Protector RNase Inhibitor，0.5μl，5×RT Reaction Buffer，4μl，10×d NTP，2μl，Maxima?Reverse Transcriptase 4μl），轻混匀，25℃孵育10 min，42℃孵育30 min，85℃加热5 min，c DNA第一链合成；PCR（试剂盒由北京罗氏公司提供）：制备10μl PCR反应液（Taq DNA聚合酶混合物，5μl，5μmol/L引物上游，0.2μl，5μmol/L引物下游，0.2μl，10μmol/L探查，0.1μl，c DNA，1.5μl，无菌去离子水，3μl)，i NOS及内参GAPDH引物（上海吉玛制药技术有限公司提供）序列（表1)，PCR扩增条件，起始变性95°C、10 min，模版变性95°C、30 s，退火延伸72°C、1 s，降温，40°C、10 s，共40个循环，2?△△Ct计算i NOS c DNA相对表达量。